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正文:
细胞的冷冻与定量复苏
—般认为,细胞在冷冻复苏过程中,胞内所形成的冰晶以及渗
透压的变化是细胞受损的主要原因。若在冷冻细胞液中加入保护剂
如二甲基亚砜(DMSO)或甘油,选择合适的冷冻及冻融速度则可减少
细咆的损害。
细胞系的短期保存可用冰箱(一75℃),若将细胞放入液态氮(
一196℃)或是其蒸气(一135℃)保存则更好。液氮冰箱保存细胞有
许多优点,不仅保存温度较低,而且可较长时间保存,几乎没有机
械性损伤的危险。因此要保存较小细胞库的活性,将其细胞存入液
氮冰箱是很必要的。
在冷冻保存细胞系的过程中,应特别注意安全问题:
(1)由于液氮可通过盛细胞的安瓿上的细小缝隙进入瓶内,当
加温时,液氮在有限的空间内迅速膨胀造成爆炸,对操作者有很大
的危险。但工作人员只要很好地掌握细胞培养瓶的密封并仔细检查
,就可减少这类意外损伤的发生频率。然而,即使是熟练的实验室
工作人员,也可能遇到一些间接原因引起的爆炸。因此,从液氮罐
中取出细胞时,操作者应戴防护面罩,直到细胞瓶安全地放入无菌
操作台中。
(2)DMSO能溶解有机物质,它可以渗入橡皮手套,透过皮肤将D
MSO渗入血液循环,因此,使用DMSO时要特别小心,避免有害化学
物质的污染,减少与皮肤的接触机会。
(3)当放入或取出冷冻细胞,或是给液氮罐盖盖子时,液氮都
会蒸发出来,因此放置液氮罐的房间要有较好的通风设备。
(4)由于冷冻物的温度极低,有造成永久性冻伤的危险,因此
操作者要注意载手套,面罩,穿工作服。
(5)玻璃安瓿不能用于保存取自于病毒感染患者的细胞系
出自http://www.bjsgyq.com/
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