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正文:

共轭焦显微镜 (Confocal microscopy) 影像分析

功能及原理:
几何光学上，光源的焦点、显微镜物镜的焦点（光在样品内部的焦点）和针孔
（pinhole）及侦测器（如:光电倍增管）的焦点位置互相对称（落在同一焦点上）称之为
：共轭焦。只有对焦的（焦点在针孔位置）的光线才能通过针孔返达侦测器，不对焦的光
线以及样品探测点外散射光的干扰都被被屏蔽掉，而形成单一侦测点的完美影像。样品在
聚焦平面的二维影像（X-Y）可经由对样品进行水平平移扫瞄得以重现。光学切片术之三
维影像，则是加上在垂直方向（Z-方向）的细微扫瞄，所得之讯号再经电脑分析处理与影
像重组呈现。共焦扫描显微镜极大之优点就在：其光学断层扫描不需将样品实际切片，就
可利用清楚显示样品内部（厚度可达10 µm）。

应用范例:
◎斑马鱼之3-D血管萤光造影
◎胞器萤光影像3-D造影

样品前处理:
若为细胞，事先将其培养在chamber slide或直径24 mm的盖玻片（coverslip，底部厚度
皆为0.17 mm）上，必要时应事先在其上poly-L-lysine涂膜在盖玻片上，以增加细胞之黏着
性，然后进行萤光染色：如免疫萤光、活体萤光染剂或是转染后表现之GFP融合蛋白。但
若为后组织切片或动物体，如斑马鱼等，则只能使用10到20倍物镜观察，且物体的移动可
能影响3-D造影。

◎单一活细胞之绿萤光融合蛋白影像3-D与追踪
◎不同蛋白分子相对位置之确认（colocalization）